RIP-seq抗体评估怎么做？小师妹看了都直呼内行！|RIP专题

原创市场部-LYR 联川生物 2022-06-07

收录于合集 #RIP专题 26个

前段时间的小师妹忧心忡忡，她一直在思考，RIP-seq抗体评估到底要注意什么？直到她看到了一篇文章......

今天，小编就把求了小师妹好久才终于拿到的这篇文章分享出来！带你从实验类型、物种适用性等六个方面入手，简单剖析一下RIP-seq抗体评估这回事儿~

01

明确实验应该类型购买的抗体说明书一般都会列出该抗体经试验验证过的适用于的分析类型，例如可以应用于WB/IHC/ICC/ELISA/IP等，RIP-seq需要的抗体级别需为IP级。
02

明确物种适用性目标蛋白的序列和结构因物种而异，除非说明书指定该抗体已针对某个物种进行验证，否则不能保证该抗体能用于某个物种进行IP，因此建议使用已针对感兴趣的物种进行过特别验证的抗体。对于常用的物种，一般都有特定的抗体。
03

选择合适的抗体宿主来源一般建议避免与目标样本物种类型相同的抗体宿主，由于物种对自身的物质形成了免疫耐受，如果抗体和抗原的来源物种一致，则比较难引起强烈的免疫应答。
04

抗体的克隆性抗体分为单克隆抗体和多克隆抗体，RIP实验建议使用单克隆抗体，但有时使用单克隆抗体IP下的蛋白量较低，可以考虑选择使用多克隆抗体。

多克隆抗体

单克隆抗体

优势

识别多个抗原表位，表明：

1、多坑可以放大若表达蛋白信号（多个抗原表位结合了多个抗体分子）

2、容忍抗原的微小变化

3、可以结合与免疫原高度同源的蛋白

优势

识别一个抗原表位，意味着

1、特异性检测一个明确的抗原表位，与其他抗原表位交叉反应可能性小

2、实验一致性高

劣势

1、容易产生批次效应

2、不利于检测抗原的特殊结构域

劣势

1、其他种属来源的靶蛋白可能不含抗原表位

2、抗原表位更容易因为样本处理过程中丢失

05

抗体规格和纯度抗体有多种生产方式和不同程度的纯化。常见的抗体来源于血清、腹水或细胞培养上清，虽然它们容易生产、容易获得和成本低，但其含有的其他免疫球蛋白和蛋白质可能是有害的，因此需要选择纯化的抗体产品。多克隆抗体需要更彻底的纯化。单克隆或重组抗体即使采用高纯度的生产方法，如果细胞培养使用了未知来源的血清，也可能含有多余的免疫球蛋白。
06

提供WB结果做WB预实验主要目的：